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ZZSTANDARD

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甄准®(代理、经销国外进口原装产品线)、zzstandard®(中药植物提取物产品线)、GlycoSci®(糖化学/碳水化合物产品线)、IsoReag®(稳定性同位素标记物产品线)、ZZBIOCO®(高端生物化学试剂产品线)、ZZSRM®(标准物质产品线)。
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ChromaDex

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ChromaDex™ 成立于 1999 年,致力于成为植物参考标准的创造者和供应者以及相关的植物化学物质的产品和服务的市场领导者。ChromaDex™ 提供必要的工具,协助对质量和市场的监管。ChromaDex™ 的主要目标是在功能性食品、制药、个人护理、膳食补充剂市场的方方面面建立起行业所能接受的信息、产品和服务。
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EXTRASYNTHESE

化学试剂

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Extrasynthese Chemical S.A.S. 于 1986 年在里昂地区(法国)成立,拥有 30 年生产化学试剂的经验,并在全球进行销售。公司配备了最先进的提取、合成、纯化和分析技术,即: 制备型 HPLC,LP / MP-LC,CCC / CPC ......分析 GC,HP-TLC,HPLC,UPLC,MS ......
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Reagecon是物理和化学标准液目录提供者,自从Reagecon最新的实验室试剂目录面世以来,分析化学领域已发生巨大的变化,不管是为了符合严格的监管要求,还是实现重大的经济意义亦或是增强竞争优势都需要有效完成每个实验室或现场分析试验。不仅必须得到正确的结果还必须证明它的针对性、有效性和准确性。此类证据必须可访问、可检索并以易于理解的形式呈现。Reagecon 继续应对这些挑战,并向客户提供一系列品种日益增多、附详细说明、稳定、可追溯并且获认证的标准液。体积校准服务:Reagecon 是爱尔兰首家获得 INAB 体积校准认证的公司且是爱尔兰唯一一家认可的在客户现场校准多道移液器的公司。校准工作可在您的所在地也可在我们的专用计量实验室进行。称量校准服务:Reagecon 提供称量校准 INAB 认证服务,其可满足所有品牌和型号衡器的需求。该项服务可在现场和实验室提供。我们可提供日常使用的核校重量的再次认证服务。温度校准服务:Reagecon 为所有的温度控制外罩提供 INAB 认证校准服务且是爱尔兰唯一一家温度覆盖范围为 -19 6°C 至 +1200°C 的公司。电化学仪器校准服务:Reagecon 提供完整的电化学仪器校准服务。利用 ISO 17025 认证设备和标准校准所有品牌和型号的 pH 测 试仪、电导率仪和溶氧仪。
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T细胞尼龙毛柱分离法

人阅读 发布时间:2020-08-20 09:40

 在研究体内及体外的免疫系统时,分离淋巴细胞群是一个关键步骤。因为现在市场上并没有针对B细胞的特异性抗血清,所以分离淋巴细胞中的T细胞并不是十分方便。

T细胞尼龙毛分离法利用了尼龙毛对B细胞的亲和力,从而使T细胞在没有严重损伤的情况下达到的足够的纯度。因为这个方法不像流式和磁珠费用昂贵,而且操作简便,所需要的条件也不高,是一种非常实用的方法。  

 (在此我向各位解释一下,现在分离T细胞的方法主要是三种,流式,磁珠法,尼龙毛法。与前两种方法相比,尼龙毛法的优势在于无需特定的设备仪器,一般的实验室均有条件操作;价格相对低廉;可以进行大量样本操作。)  

 首先要指出的是实验中所使用的是分离T细胞专用的尼龙毛(Nylon Fiber),不是化工上的尼龙纤维,曾经有人问过我这种问题,如果你买错了,可是做不出来的!

其次,现在市面上的尼龙毛也是良隽不齐,也有同仁反应买到的尼龙毛加入缓冲液以后成了一团糨糊,根本没法使用,这个问题就要靠各位的慧眼了。   
现在市面上有尼龙毛填料,也已经有了商品化的尼龙毛柱子,这两者的区别主要是以下两点:   

1. 商品化的柱子的填料量是已经定好的,有一个确定的上样量范围。而自己买填料装柱可以控制填料量,也就是可以控制上样量,这对于样本量非常少,或是样本量非常大的实验需求非常合适。  

 2. 商品化的柱子已经经过了无菌处理(一般是辐射灭菌),而自己装柱当然就要自己灭菌了。   

3. 商品化的柱子在实验的重复性上有着绝对的优势。自己装的柱子在填料的处理和装柱的松紧等方面不容易控制,差异性的控制就看你的实验技巧了。   

操作方法:   
1.秤取1.5g尼龙毛装入20-30ml玻璃或一次性注射器内(要可以灭菌的),填料的体积控制在15毫升左右(注射器上有标记,所以还是比较好控制的),因为尼龙毛的松紧关系到T细胞的回收率,

所以要特别注意。注射器下端配接5厘米左右长的带有弹簧夹的橡皮管。  

2. 加入大量的PBS平衡柱子后,用铝箔包裹,并置于适当的容器内,高压灭菌15分钟。 (商品化尼龙毛柱以上步骤可以省略,经过无菌PBS平衡后直接进行下列步骤。)  

3. 灭菌的尼龙毛柱垂直固定后放于超净台内,顶部以铝箔覆盖,避免污染。  

4. 橡皮管,弹簧夹用wu水酒精消毒后接注射器下端,打开弹簧夹调节流速在大约3-4ml/min。   

5.首先,加入3-4倍柱体的无血培养基平衡;随后,之后加入相同体积的含有血清的培养基平衡(上述培养基都要预热),最后等培养基页面接近柱填料页面时,关闭弹簧夹。  

6. 样本细胞悬浮液浓度控制在5×108cells/ml的,上样量一般是1/3-1/5柱体积(商品化的柱子一般都有推荐上样量)。样品加入之后,再加入少量培养液,然后关闭弹簧夹。  

7. 柱上覆盖铝箔,移置于消毒过的容器中,37℃孵育1小时。此过程中柱子必须要保持垂直状态。   

8. 从培养箱中拿出柱子,置于超净台内,除去铝箔。接上按照4.中的方法消毒的弹簧夹和橡皮管,加入适当体积经37℃预热的培养基,打开弹簧夹控制流速在3-4 mL/min,流出约5ml之后,流出的培养液基变得不透明,此时其中含有T细胞,收集这一部分培养基。

9. 基本上何时结束收集取决于流出液体中细胞的浓度,实际上,收集的量达到一个柱体积时就可以停止收集,因为即使收集更多的量,回收率几乎不会增加。  

10 。参考数据:   样本:小鼠脾脏(T细胞含量在30-40%,B细胞含量在55-60%)   细胞回收率:13-25%   B细胞污染率:小于15%   

 样本:大鼠脾脏(T细胞含量在30-35%,B细胞含量在55-65%)   细胞回收率:大于25%   B细胞污染率:小于15%      

样本:人或兔外周血   细胞回收率 : 20-30% (人);25-35% (兔)   B细胞污染率:小于5% (人、兔)     

 (注)收集粘附于尼龙毛上的细胞时,将T细胞收集完毕后的尼龙毛在无菌操作的状态下取出,转移到适当的容器中,用镊子小心的将尼龙毛松开,粘附的细胞可以洗到培养基中。

或者将注射器芯插入注射器内,通过压力使的粘附的细胞随着液体流出。      

产品信息   品牌 品名 规格   Wako T细胞尼龙毛柱 0.5g*10 (推荐用于小鼠脾脏)   Wako T细胞尼龙毛柱L型 1g*10 (推荐用于大鼠脾脏、人或兔子的外周血)  

 Wako T细胞尼龙毛 2g*5 (可按照自己的需要装柱,控制上样量)   Wako 小鼠淋巴细胞分离试剂 30mL*5 用于从小鼠脾脏,淋巴结,淋巴结悬浮液中分离淋巴细胞  

 Wako 人淋巴细胞分离试剂 100ml*6 用于从人血中提取淋巴细胞   Wako 铁粉(羰ji铁)Iron Powder, from Iron Carbonyl 25g 直径25um,用于清除巨噬细胞   Wako κ-卡拉胶κ-Carrageenan 25g   

  以上资料仅供参考,详情请参照原试剂盒说明书!   更多相关产品信息,欢迎咨询:   上海甄准生物科技有限公司   电话 021-58979353

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